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HJ 1216-2021 水质 浮游植物的测定 0.1ml 计数框-显微镜计数法.pdf简介：

HJ 1216-2021 是中国环保部门颁发的一项标准，全称为《水质 浮游植物的测定 0.1ml 计数框-显微镜计数法》。该标准主要针对水质中浮游植物（如藻类、细菌、原生动物等）的测定，采用的是0.1ml计数框-显微镜计数法。

这种方法的基本原理是将一定体积的水样（通常为0.1ml）通过过滤或吸取，然后将滤液或吸取液滴在预制的0.1ml计数框上，该计数框通常有多个小格，每个小格的面积已知。通过显微镜观察，计数框内的浮游植物数量，包括活的和死的。计算出单位体积（如1L或1m³）水样中的浮游植物总数，以此反映水体的生物多样性及环境状况。

使用这种方法进行浮游植物的测定，首先需要对水样进行处理，如过滤或吸取，然后在显微镜下进行仔细观察和计数。这种方法操作相对简单，但需要精确的计数技能和对浮游植物形态的识别能力。同时，由于浮游植物数量可能非常微小，所以需要对显微镜和计数框进行定期校准以保证准确性。

总的来说，HJ 1216-2021 是一种用于监测水质变化、评估水体生态环境的重要技术手段，广泛应用于湖泊、河流、海洋等各类水体的环境监测。

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本标准引用了下列文件或其中的条款。凡是注明日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本标准。 凡是未注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。 GB/T14581 水质湖泊和水库采样技术指导 HJ/T91 地表水和污水监测技术规范 HI494 水质采样技术指导

下列术语和定义适用于本标准。 3.1 浮游植物 phytoplankton 在水中营浮游生活的微小藻类植物，通常浮游植物就是浮游藻类，包括原核的蓝藻和其它各类真核 藻类。 3.2 显微镜计数视野 microscopecountingfield 显微镜视野中限定一定面积的区域，用于定量计数浮游植物 3.3 检出限detectionlimit 单次计数过程中，发现的概率不低于99%时最低的浮游植物密度，

在显微镜下，利用0.1m计数框对样品申的浮游植物进行人工分类和计数，计算单位体积样品中 各种类浮游植物的细胞数量。

除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂，实验用水为新制备的去离子水或蒸留水。 5.1碘（12）。 5.2碘化钾（KI）。 5.3甲醛溶液：W(HCHO)=37%～40% 5.4丙三醇（HOCH2CHOHCH2OH)。 5.5鲁哥氏碘液： 称取60g碘化钾（5.2），溶于100ml水中，再加入40g碘（5.1），充分搅拌使其完全溶解，加水 定容至1000ml，转移至棕色磨口玻璃瓶[河北]外挑水平防护网施工技术交底（4P），室温避光保存。

6.125号浮游生物网：网孔直径为0.064mm，网呈圆锥形，网口套在铜环上，网底端有出水开关 塞。 6.2定性采样瓶：30ml~100ml广口聚乙烯瓶。 6.3采水器：不锈钢或有机玻璃材质，圆柱形。容量和深度规格要满足采样要求。 6.4定量采样瓶：1L～2L广口聚乙烯瓶。 6.5正置或倒置生物显微镜：物镜4×、10×、20×、40×，目镜10×或15×。 6.6浓缩装置：1L～2L筒形分液漏斗或量筒。 6.7样品瓶：50ml具塞棕色玻璃广口瓶。 6.8超声波发生装置：工作频率40kHz，水浴方式。 6.9微量移液器：100μl。 6.100.1ml浮游植物计数框：面积20mm×20mm，框内划分横竖各10行格，共100个小方格 6.11 盖玻片：面积22mm×22mm，厚度小于0.2mm。 6.12 载物台测微计：又称镜台测微计，1mm/100DIV，分划值为0.01mm。 注：DIV指等分格，1mm/100DIV即1mm等分成100格。 6.13目镜分划板：又称目镜测微尺，5mm/50DIV，分划值为0.1mm。 6.14计数器。

点位布设及采样频次按照GB/T14581、HJ/T91和HJ494的相关规定执行。也可根据调查研究目 的确定。 使用25号浮游生物网（6.1）采集定性样品。关闭浮游生物网底端出水活塞开关，在水面表层至0.5m 深处以20cm/s～30cm/s的速度做“co”形往复，缓慢拖动约1min～3min，待网中明显有浮游植物进 入，将浮游生物网（6.1）提出水面，网内水自然通过网孔滤出，待底部还剩少许水样（5ml～10ml）

HJ1216—2021

将底端出口移入定性采样瓶（6.2）申，打开底端活塞开关收集定性样品。采集分层样品时，用 游生物网（6.1）过滤特定水层样品，其他步骤同采集表层样品。定性样品采集完成后及时将浮 网清洗干净。样品采集后冷藏避光运输， 如有定性样品采集的技术规范，按技术规范有关要求执行。

7. 1. 2 定量样品

按照GB/T14581、HJ/T91和HJ494的相关规定进行定量样品的采集。 用采水器（6.3）采集样品至定量采样瓶（6.4）中，一般采集不少于500ml样品。若水体透明度较 高，浮游植物数量较少时，应情增加采样体积。定量样品采集后，样品瓶不应装满，以便摇匀。 注1：有些浮游植物（如蓝藻）常浮于水面或成片、条带分布，可在此水华密集区域采样作为峰值参考。 注2：定量样品采集应在定性样品采集之前。应保持固定时间段采样，以便结果之间可相互比较

7. 2. 1 定性样品

定性样品采集后立即加入鲁哥氏碘液（5.5），用量为水样体积的1.0%～1.5%。镜检活体样品不加 鲁哥氏碘液固定。定性样品在室温避光条件下可保存3周；1℃～5℃冷藏避光条件下可保存12个月。 活体样品在4℃～10℃避光条件下可保存36h

定量样品采集后立即加入鲁哥氏碘液（5.5）固定，用量为水样体积的1.0%～1.5%。也可将鲁哥氏 碘液（5.5）提前加入定量采样瓶（6.4）中带至现场使用。定量样品在室温避光条件下可保存3周；1℃~ 5℃冷藏避光条件下可保存12个月。 样品在保存过程中，应每周检查鲁哥氏碘液（5.5）的氧化程度，若样品颜色变浅，应向样品中补 加适量的鲁哥氏碘液（5.5），直到样品的颜色恢复为黄褐色， 注：若样品需长期保存，应加入甲醛溶液（5.3），用量为水样体积的4%，

每次取样前，采用上下颠倒至少30次的方式充分混匀所采样品，混匀动作要轻

在显微镜（6.5）下观察定性样品（7.1.1）， 鉴定浮游植物的种类。优势种类鉴定到种，其他种类至 少鉴定到属。部分物种鉴定参考资料见参考文献， 注：种类鉴定除用定性样品观察外，还可吸取已完成计数的定量样品进行观察

8. 3. 1 试样制备

8.3. 1. 1预检

将样品放至室温，用微量移液器（6.9）取0.1ml混匀样品，注入0.1ml浮游植物计数框（6.10） 中，用盖玻片（6.11）将计数框（6.10）完全盖住，静置片刻，无气泡可观察样品，如有气泡应重新取 样。随机选取若干计数小格或视野，初步估计浮游植物的数量。 对于含有细胞聚集成团的浮游植物样品，当不满足以下两个条件中的任何一个时，应进行超声波分 教处理： a） 群体中的浮游植物细胞个体较易被辨识，能够对群体中的细胞进行计数； b） 当群体中所含细胞数量与群体体积或长度有固定比例时，如空星藻、盘星藻、丝状藻等，可以 将群体作为计数对象，依据比例得到浮游植物细胞数量。

8.3.1.2调整浮游植物密度

适宜测定的浮游植物密度为10°cells/L～108cells/L。若定量样品（7.1.2）申的浮游植物细胞密度低 于107cells/L，应浓缩样品；若定量样品（7.1.2）中的浮游植物细胞密度高于10°cells/L，应稀释样品。 最终使加入计数框中的0.1ml样品约含有500个～10000个浮游植物细胞。 样品浓缩：将全部定量样品摇匀倒入浓缩装置（6.6）中，避免阳光直射的环境下，静置48h。用 细小虹吸管吸取上清液置于烧杯中，直至浮游植物沉淀物体积约20ml。旋开浓缩装置（6.6）底部活塞， 将浮游植物沉淀物放入100ml量筒中。用少许上清液冲洗浓缩装置（6.6）1～3次，将冲洗水一并放入 量筒中，再用上清液定容至所需浓缩倍数的体积。为了减少浮游植物吸附在浓缩装置壁上，在静置初期， 应适时轻敲浓缩装置器壁。虹吸过程中，吸液口与浮游植物沉淀物间距离应大于3cm。如水样中浮游 值物密度极低，采样量1L及以上时，可多次浓缩，即每次浓缩后再静置24h～48h，重复浓缩操作， 周整至所需浓缩倍数体积。浓缩后的样品可根据需要，经超声处理后计数。 样品稀释：根据稀释倍数，选取相应体积的容量瓶，量取不少于25ml混匀后的定量样品或经超声 分散处理后的样品，用水定容至刻线。如要保存稀释后的样品，应注意补充鲁哥氏碘液（5.5），使稀释 后的样品中的鲁哥氏碘液浓度与稀释前一致。 注：超声波分散处理具体步骤为取混匀的定量样品于样品瓶（6.7）中，用超声波发生装置（6.8）处理约10min后， 在显微镜（6.5）下观察，如仍存在大量未分散的细胞团，则应延长超声波处理时间，直至能够准确计数。超 声波分散处理过程中应注意水温，防止过热造成水分蒸发和浮游植物细胞结构被破坏

8. 3. 2. 1装片

用滴管吸取少许丙三醇（5.4）均匀涂抹盖玻片四周， 十数框水分蒸发形成气泡。涂抹时应避免渗入计数框

8.3.2.2选取计数方式

根据调整后样品（8.3.1.2）中浮游植物的密度，选用一种适当的计数方式，使测定过程中浮游机 包的总计数量为500个～1500个。表1为推荐选用的计数方式。

HJ1216—2021

表1推荐选用的计数方式

8. 3. 2. 3计数

8.3. 2.3. 1全片计数方式

在40×物镜下，逐一观察浮游植物计数框中全部100个小方格，分类计数每个小方格内所有 勿细胞，并记录每行的分类计数结果。若浮游植物细胞体积较大时，可降低物镜倍数。

8.3.2.3.2行格计数方式

在40×物镜下，逐一观察浮游植物计数框中第2、5、8行，共30个小方格，分类计数每个小 斤有浮游植物细胞，并记录每个小格的分类计数结果。若浮游植物细胞体积较大时，可降低物镜倍装

8.3.2.3.3对角线计数方式

在40×物镜下，逐一观察位于浮游植物计数框对角线位置上的10个小方格，分类计数每个小 斤有浮游植物细胞，并记录每个小格的分类计数结果。若浮游植物细胞体积较大时，可降低物镜倍

GB 8519-1987 灰浆搅拌机技术条件8.3.2.3.4随机视野方式

在40×物镜下，随机抽取一定数量的视野，分类计数每个视野内所有浮游植物细胞，并记录每个 视野的分类计数结果。若浮游植物细胞体积较大时，可降低物镜倍数。计数前应测量或计算显微镜视野 面积，测量和计算方法参见附录B。

8.3.2.3.5计数要求

每一样品装片计数两次。两次浮游植物细胞总计数量结果相对偏差应在土15%以内，否则应增加计 数一次，直至某两次计数结果符合这一要求为止。测定结果为相对偏差在土15%以内的两次计数结果的 平均值。

式：N一 样品中浮游植物的密度，cells/L；

式中：N—样品中浮游植物的密度JB∕T 7307-2016 土方机械 计时表 试验方法，cells/L；

A。一计数面积，当计数方式为对角线、行格和全片时计数面积分别为A/10、3A/10和A，当 计数方式为随机视野时计数面积为总视野面积，mm²； 显微镜观察计数的浮游植物细胞数，cells； V一计数框容积，ml; Vi一一稀释或浓缩后的试样体积，ml； Vo一—稀释或浓缩前的样品体积，ml； 1000—体积换算系数，ml/L

测定结果以科学计数法表示，保留2位有效数字。