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GBT 18638-2021 流行性乙型脑炎诊断技术.pdf简介：
，由于我是一个的，我无法直接提供PDF文件的简介或内容。"GBT 18638-2021 流行性乙型脑炎诊断技术"是中国国家标准（GB/T）中的一份技术文件，该标准详细规定了流行性乙型脑炎（简称乙脑）的诊断技术。这份标准可能包含了诊断方法、实验室检测流程、临床表现的判断依据、病例定义、预防和控制措施等内容，旨在帮助医疗机构和公共卫生部门准确、及时地识别和处理乙脑病例，以控制疾病的传播和减少其对公众健康的影响。如果你需要了解具体内容，建议你直接查阅该PDF文件或咨询相关专业人员。
GBT 18638-2021 流行性乙型脑炎诊断技术.pdf部分内容预览：
11.3.1感染细胞的制备
11.3.2.1细胞病变（细胞圆缩、破裂）约达60%~80%时，收集细胞培养物，以1500r/min离心 10min，弃上清液，用PBS洗涤细胞沉淀物3次，用PBS重悬细胞 11.3.2.2取10μL细胞悬液，滴加于抗原片各孔中，同时制备正常细胞对照片。 11.3.2.3吹干滴好的抗原片，用4℃预冷的丙酮固定10min，保存于一20℃，一周内使用
3.2.1细胞病变（细胞圆缩、破裂）约达60%~80%时，收集细胞培养物，以1500r/min离 min，弃上清液，用PBS洗涤细胞沉淀物3次，用PBS重悬细胞。 3.2.2取10μL细胞悬液，滴加于抗原片各孔中，同时制备正常细胞对照片。 3.2.3吹干滴好的抗原片，用4℃预冷的丙酮固定10min，保存于一20℃，一周内使用
11.3.3间接荧光抗体染色
1.3.3.1取出抗原片室温放置10min待用 1.3.3.2用PBS将待检血清、阴性血清及阳性血清分别稀释成1：100和1：500两个稀释度，分别取 0uL滴加于抗原片各孔中。 1.3.3.3将加样抗原片置于湿盒内，37℃孵育30min。 1.3.3.4 用PBS浸洗3次《低压电气装置 第4-42部分：安全防护 热效应保护 GB／T 16895．2-2017》，每次10min。 1.3.3.5 取20μuLFITC标记的抗被检动物IgG滴加于上述处理过的抗原片各孔中，孵育同11.3.3.3， 先涤同11.3.3.4。 11.3.3.6取级冲甘油封片.置于荧光显微镜下观察
11.4.1未感染病毒细胞对照：正常细胞制备的抗原片中，加入阳性血清，细胞内无荧光颗粒。 11.4.2阴性对照血清：JEV感染细胞制备的抗原片中，加入阴性血清，细胞内无荧光颗粒。 11.4.3 阳性对照血清：JEV感染细胞制备的抗原片中，加人阳性血清，细胞内可见清晰的黄绿色荧光 颗粒。 11.4.4在以上条件成立的基础上，进行检验血清判断
JEV感染细胞制备的抗原片中，加人待检血清，细胞内可见清晰的荧光颗粒，判为血清中JEV抗体 阳性。
12病毒中和试验检测方法
12.1.1恒温CO2培养箱。
12.6.1细胞层染色呈蓝色为阳性孔（病毒被中和），不着色为阴性孔（病毒未被中和），以血清能够中和 50%病毒时的稀释度为血清最终滴度。 12.6.2被检血清最终滴度为1：4或更高者判定为阳性。 12.6.3被检血清最终滴度低于1：4判定为阴性。 12.6.4 被检血清最终滴度在1：2和1：4之间判定为可疑，重复试验结果为1：4或更高时判定为 阳性
12.6.1细胞层染色呈蓝色为阳性孔（病毒被中和），不着色为阴性孔（病毒未被中和），以血清能够中和 50%病毒时的稀释度为血清最终滴度。 12.6.2被检血清最终滴度为1：4或更高者判定为阳性。 12.6.3被检血清最终滴度低于1：4判定为阴性。 12.6.4 被检血清最终滴度在1：2和1：4之间判定为可疑，重复试验结果为1：4或更高时判定为 阳性
50XTAE: 三羟甲基氨基甲烷(Tris) 乙二胺四乙酸二钠（NazEDTA·2H,O) 去离子水(H2O) 冰乙酸(CH,O) 加去离子水至1000mL
B.3钙镁溶液（用于补体结合试验检测方法
附录B （规范性附录
体结合试验检测方法和血凝抑制试验检测方法用试剂配制
母液1:0.05mol/L硼砂（Na2B,O，·12H2O)溶液，硼砂5.2g，加双蒸馏水或无离子水至250ml 母液11：0.2mo1/L硼酸（H3BO3）溶液，硼酸1.2g，加双蒸馏水或无离子水至100mL。 使用液：母液1132mL十母液1I18mL十生理盐水460mL。配制后测定pH值，如不到9.0，可 量0.05mol/L硼砂溶液。105kPa20min高压灭菌。临用前，在使用液中添加0.4%牛血清白蛋白
B.5不同pH值磷酸盐缓冲液（PBS)
母液1：1/15mol/L磷酸氢二钠（Na2HPO,）溶液，无水磷酸氢二钠9.47g，加双蒸馏水或无离子水 至1000ml。 母液Il:1/15mol/L磷酸二氢钾（KH2PO，）溶液，磷酸二氢钾9.08g，加双蒸馏水或无离子水至 1000mL。 pH5.8PBS：母液18.0mL+母液II92mL+生理盐水566mL； pH6.0PBS母液112.2mL+母液II87.8mL十生理盐水566mL； pH6.2PBS：母液118.6mL十母液II81.4mL十生理盐水566mL； pH6.4PBS:母液126.7mL+母液II73.3mL十生理盐水566mL； pH6.6PBS：母液137.5mL+母液II62.5mL+生理盐水566mL； pH7.4PBS：母液I80.8mL+母液II19.2mL+生理盐水566mL。
B.625%自陶土悬液（用于血凝抑制试验检测方
取优质白陶土粉末25g，加pH7.4磷酸盐缓冲液至100mL，105kPa20min高压灭菌4℃保存 可用1个月。临用前摇匀。
C.1.1溶血素的稀释
附录C （规范性附录） 补体结合试验检测方法的预备试验
吸取溶血素0.1mL（含50%甘油者用0.2mL)，加钙镁盐水9.9mL（含50%甘油者加9.8mL）， 后即为1：100的溶血素，然后取1：100溶血素1mL加钙镁盐水4mL，即为1：500的溶血素。 表C.1进行稀释。
表 C.1溶血素稀释液制备
C.1.2溶血素的滴定
已稀释的溶血素吸到另一排小试管内，每管0.1ml，然 后按表C.2依次加入补体、钙镁盐水及1%绵羊 摇匀后，置37℃水浴中30min，观察结果。
表 C.2溶血素的滴定
C.1.3溶血素单位计算
能使红细胞完全溶解的溶血素的最高稀释度称为1个溶血素单位。表C.1中的G管，即0.1mL 1：6000的溶血素含有1个单位。试验中应用2个单位的溶血素。即将溶血素稀释成1：3000，则 0.1mL中含有2个单位溶血素。
C.2.1滴定方法：吸取补体0.1mL，加钙镁溶液4.9mL，即1：50稀释补体。然后按表C.3的量，分别 加入三排小试管中，再依次加入钙镁溶液、4个单位溶血素或1：5稀释抗原，混匀后，放37℃水浴中 30min，再加入致敏绵羊红细胞（1%绵羊红细胞悬液与等量2个单位溶血素相混合，放37℃水浴中 15min），摇匀后，放37℃水浴中30min，观察结果
表C3补体效价的滴定
C.2.2补体稀释倍数的计算：能使红细胞完全溶解的最小补体量为一个单位，正式试验和抗原滴定时 都用2个补体单位。 计算方法如下： 0.12mL的1：50补体为1个单位，2个单位补体应为0.24mL的1：50补体。补体稀释倍数以数 值X，表示，按下列公式计算：
.2.2补体稀释倍数的计算：能使红细胞完全溶解的最小补体量为一个单位，正式试验和抗原滴定 阝用2个补体单位。 计算方法如下： 0.12mL的1：50补体为1个单位，2个单位补体应为0.24mL的1：50补体。补体稀释倍数以 直X，表示，按下列公式计算
式中： X，一—2个单位补体稀释倍数的数值，为50； V2一滴加补体溶液的体积的数值，为0.2，单位为毫升（mL）； V，一一含2个单位补体的溶液体积的数值，为0.24，单位为毫升（mL）。 计算结果表示到小数点后两位
式中： X，——2个单位补体稀释倍数的数值，为50； V2—滴加补体溶液的体积的数值，为0.2，单位为毫升（mL）； V，—含2个单位补体的溶液体积的数值，为0.24，单位为毫升（mL）。 计算结果表示到小数点后两位
C.3病毒抗原效价的滴定
C.3.1.1按表C.4纵横排列试管，分别加入稀释的抗原和免疫血清各0.1mL，每管加人稀释补体 0.2ml（含2个单位）。 C.3.1.2加抗原：除对照A5、A6、A8、A9孔外，各孔加待检样品25μL。 C.3.1.3 3加补体：除空白对照A9孔外，各孔加补体工作液50μL。 C.3.1.437℃振荡60min。 C.3.1.5制备敏化红细胞和加样：2.8%红细胞悬液与溶血素工作液等体积混合，25℃敏化20min。各 反应孔加25μL/孔。 C.3.1.637℃振荡30min,1000r/min离心30min
表C.4微量补体结合试验
完全抑制溶血者为“+十十+ 完全不抑制溶血者为“一”。与最高稀释 免疫血清发生100%抑制溶血的抗原，其抗原的最高稀释倍数就是抗原的效价。正式试验时须用较 高浓度（约4倍~8倍）的抗原，一般用抗原原液的1：4或1：8稀释液
E.20.1mol/L磷酸盐缓冲液(PBS.pH 7.4
玻璃幕墙安装施工交底记录附录E （规范性附录） 间接ELISA抗体检测方法试验用试剂配制
9份分析纯无荧光的甘油加1份0.2mol/L碳酸盐缓冲液（pH9.2)配制而
附录F （规范性附录） 间接免疫荧光试验(IFA)检测方法试验用试剂配制
PBS(0.01 mol/L,pH 7.4) 8g氯化钠（NaCI)、0.2g氯化钾（KCI）、2.9g磷酸氢二钠（NazHPOGB∕T 51405-2019 船厂总体设计标准，·12H,O）、0.2g磷酸二氢 H,PO,），双蒸水加至1000mL。保存于4℃备用
2PBS(0.01 mol/L.pH
8g氯化钠（NaCI)、0.2g氯化钾（KCI）、2.9g磷酸氢二钠（NazHPO，·12H,O）、0.2g磷酸二氢钾 （KH，PO），双蒸水加至1000mL。保存于4℃备用