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GBT 40392-2021 循环中军团菌的检测.pdf简介：

GBT 40392-2021 是中国国家标准，全称《公共场所空气中军团菌的检测方法》。该标准主要针对公共场所空气中军团菌的检测技术进行了规定，军团菌是一种常见的环境细菌，特别是在空调系统、水和土壤中，可能会造成健康问题，如军团病。

循环水系统（如冷却塔、暖气系统）是军团菌滋生的常见环境。GBT 40392-2021 提供了详细的检测方法，包括采样、样本处理、军团菌的培养和鉴定步骤，以及实验室环境的要求。它包括了军团菌的分离培养、显微镜检查、PCR检测等技术，旨在确保公共场所的空气质量达到安全标准，防止军团菌引发的疾病传播。

检测流程一般包括：环境采样、样品处理（如富集、浓缩等）、分离培养、菌落形态鉴定和基因检测（如通过16S rRNA基因测序），最后根据结果判断是否超标。实施该标准的目的是为了保障公众健康，提高环境卫生管理水平。

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7.1离心机：转速为0r/min～8000r/min。配有300mL～500mL具螺旋盖的离心瓶。 7.2真空泵。 7.3 超声波振荡器或涡旋混合器。 7.4 无菌涂布器。 7.5CO2培养箱：36℃±1℃。 7.6 普通光学显微镜或荧光显微镜。 7.7 紫外线灯：波长为360nm±20nm。 7.8 无菌接种环：直径为3mm。 7.9 无菌平Ⅲ：直径为90mm。 7.10 无菌镊子。 7.11 微量移液器：100μL、200μL。 7.12 无菌微孔滤膜：直径为47mm~50mm，孔径为0.22um或0.45um

7.1离心机：转速为0r/min～8000r/min。配有300mL～500mL具螺旋盖的离心瓶。 7.2真空泵。 超声波振荡器或涡旋混合器。 无菌涂布器。 7.5 CO 培养箱:36 ℃±1 ℃。 7.6音 普通光学显微镜或荧光显微镜。 7.7 紫外线灯：波长为360nm±20nm。 7.8 无菌接种环：直径为3mm。 7.9 无菌平皿：直径为90mm。 7.10 无菌镊子。 7.11 微量移液器：100μL、200μL。 7.12 无菌微孔滤膜：直径为47mm~50mm，孔径为0.22um或0.45um

水样中含有杂质时可静置沉淀或1000r/min离心1min，取上清液备用。

TD／T 1055-2019标准下载GB/T403922021

在真空过滤系统上安装微孔滤膜，取水样上清液200mL～1000mL过滤，记录过滤水样的体积 Vto。过滤后取下滤膜，置于带盖的无菌容器中，用无菌剪刀剪碎，加15.0mL无菌水，放入涡旋混合器 振荡至少2min（也可将容器放人超声波振荡器中振荡2min～10min，稀释液液面应低于超声波振荡 器水面）充分洗脱，作为浓缩液备用，记录体积V。。 当样品中军团菌的菌落数量超过105CFU/L时，可不进行样品浓缩处理，计数时按直接涂布法 计数。

9.2.1将9.1.2的浓缩液（无需浓缩时取原液）分成三份。其中一份不做处理，另两份分别采用热处理 和酸处理方式处理。 9.2.2热处理：移取1.0mL浓缩液（或原液）于一无菌容器中，置于50℃士1℃的水浴中加热30min 9.2.3酸处理：移取3.0mL浓缩液（或原液）于一无菌容器中，加入3.0mL酸缓冲液摇匀，其pH值约 为2.2.放置5min

经处理、热处理、酸处理样品各0.1mL，用无菌涂布器 种液均匀涂布于相对应的GVPC培养基平皿的整个表面

将已接种的平板倒置放人CO2培养箱中，调节CO2浓度为2.5%，温度为36℃土1℃，相对湿度 于95%,培养10 d。

培养期间，在第三天开始检查培养皿，并在培养期结束时进行最终检查，记录可疑军团菌菌落的数 量。在平板上生长小于300个菌落为宜，如有天量军团菌生长，则应减少过滤样品的体积或稀释浓缩 液。军团菌的生长可能被其他菌掩盖或抑制，如果怀疑军团菌被抑制应重新处理水样进行培养。 典型的军团菌菌落通常呈白色、灰色、蓝色或紫色，也可能出现棕色、灰绿色、深红色。菌落表面光 滑，边缘整齐，呈典型毛玻璃状。在紫外光下有荧光，荧光的颜色有助于区分样品中军团菌的不同种类。 为了避免军团菌的死亡，不能将平板长时间暴露在紫外灯下，宜在数秒内完成，

GB/T 403922021

9.7嗜肺军团菌的鉴定

水样中军团菌的计数以每升样品中的菌落数X计，单位为菌落形成单位每升（CFU/L），按公 式（1）计算：

/V 1 N X1000

GVPC培养基上疑似军团菌的菌落数，单位为菌落形成单位（CFU)； 确认的军团菌菌落数，单位为菌落形成单位（CFU)； N 培养基上挑取的疑似军团菌菌落数，单位为菌落形成单位（CFU）； V 一接种的原液的体积的数值，单位为毫升（mL）（原液、热处理样品：V=0.1；酸处理样品： V=0.05)

水样中军团菌的计数以每升样品中的菌落数X计，单位为菌落形成单位每升（CFU/L)，按公 式（2）计算：

.V. N VV. X1000 ( 2

GVPC培养基上疑似军团菌的菌落数，单位为菌落形成单位（CFU)； N 确认的军团菌菌落数，单位为菌落形成单位（CFU）； N 培养基上挑取的疑似军团菌菌落数，单位为菌落形成单位（CFU)； V 量取的无菌水的体积的数值，单位为毫升（mL）（V。=15.0）； V 接种的浓缩液的体积的数值，单位为毫升（mL）（未经处理的浓缩液样品、热处理样品 V=0.1；酸处理样品V=0.05)； Vot 过滤水样的体积的数值，单位为毫升（mL）。

分别对未经处理、热处理和酸处 算，取结果的最大值作为该水样中军团菌的数量X，此数值为此份样品中军团菌的最大可能

GB/T403922021

1经检测水样中未见军团菌可疑菌落生长时，在检测报告中注明“未检出军团菌”，并注明检测水 积。 2经检测并确认存在军团菌时，在检测报告中注明“检出军团菌”。如需标注军团菌数量时，给出 菌的数量X（CFU/L)。 3经鉴定为嗜肺军团菌时，在检测报告中注明“检出嗜肺军团菌”并给出其血清分型。如需标注 军团菌数量时，给出嗜肺军团菌数量X（CFU/L）

11.1经检测水样中未见军团菌可疑菌落生长时，在检测报告中注明“未检出军团菌”，并注明检测水样 体积。 11.2经检测并确认存在军团菌时，在检测报告中注明“检出军团菌”。如需标注军团菌数量时，给出军 团菌的数量X（CFU/L）。 11.3经鉴定为嗜肺军团菌时，在检测报告中注明“检出嗜肺军团菌”并给出其血清分型。如需标注嗜 肺军团菌数量时.给出嗜肺军团菌数量X（CFU/L）

A.1.2.1半胱氨酸和焦磷酸铁的溶解

A.1.2.2ACES缓冲液

将ACES颗粒加入到500mL水中，于45℃～50℃水浴溶解。另取480mL水溶解氢氧化钾，轻 遥溶解，将两种溶液混匀

A.3选择性培养基（GVPC培养基）

注：此培养基是在BCYE的基础上再加人三种抗生素及甘氨酸。

A.3.1选择性添加剂

GB/T403922021

A.3.2抗生素添加剂的制备

A.3.2.1取适量的多粘菌素B(一般为200mg)溶解于100mL水中，使其浓度为145451U/mL。混匀 后进行膜过滤除菌。用无菌管进行分装，每管5.5mL，于一25℃～一15℃保存。使用时，放至室温后 再用。 A.3.2.2取20mg万古霉素盐酸盐溶解于20mL水中，混匀后，进行膜过滤除菌。用无菌管进行分装， 每管1mL，于一25℃～一15℃保存。使用时，放至室温后再用。 A.3.2.3取2g放线菌酮溶解于100mL水中，混匀后，进行膜过滤除菌。用无菌管进行分装，每管 4mL，于一25℃～一15℃保存。使用时，放至室温后再用。 A.3.2.4以上抗生素添加剂冷冻保存最长时间为6个月

A.3.3GVPC培养基的制备

A.4.2.1溶液 A:0.2 mol/L 盐酸

在1L水中加人17.4mL浓盐酸.混勾。于121℃±1℃高压蒸汽灭菌15min

A.4.2.2溶液B:0.2mol/L氯化钾

将14.9g氯化钾溶解于1L水中，于121℃土1℃高压蒸汽灭菌15min。

A.4.2.3酸缓冲液

取3.9mL溶液A和25mL溶 mol/L氢氧化钾调节pH值到2.2土0.2，置于具 皮璃瓶中，该溶液在室温下避光放置不超过1个月

JTS∕T 164-1-2021 港口货运车辆射频识别系统工程技术规范四甲基对苯二胺盐酸盐

四甲基对苯二胺盐酸盐

使用前迅速将上述成分溶于水中。

4.6.3硝酸盐还原试剂

蛋白陈 氯化钠 葡萄糖 磷酸二氢钾 0.4%酚红溶液 琼脂 水 20%尿素溶液

蛋白陈 氯化钠 葡萄糖 磷酸二氢钾 0.4%酚红溶液 琼脂 水 20%尿素溶液

将除尿素和琼脂以外的成分配好，并校正pH值，加入琼脂，加热溶化并分装烧瓶，于121℃土1 灭菌15min。冷却至50℃～55℃，加人经除菌过滤的尿素溶液。尿素的最终浓度应为2%，最 值应为7.2士0.1。分装于灭菌试管内GB 51357-2019-T：城市轨道交通通风空气调节与供暖设计标准（无水印，带书签），放成斜面备用