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GBT 40664-2021 用于高通量测序的核酸类样本质量控制通用要求.pdf简介：

GBT 40664-2021 是中国国家标准《高通量测序的核酸类样本质量控制通用要求》的简称，它是一部关于高通量测序（Next Generation Sequencing, NGS）中核酸样本质量控制的重要指南。高通量测序是一种在短时间内并行处理大量样本，进行大规模基因测序的技术，广泛应用于生物学、医学、农业等领域。

该标准详细规定了核酸样本在进行高通量测序前的质量控制流程，包括但不限于样本采集、存储、处理、纯化、定量、核酸完整性、浓度、片段大小、均一性、DNA/RNA污染等多方面的指标。它旨在确保样本质量的稳定和一致，从而提高测序数据的准确性和可靠性，减少因样本质量问题导致的实验误差。

具体要求可能包括：

1. 样本保存：在采集后应尽快进行处理，避免核酸降解和污染。

2. 样本纯化：确保核酸提取的纯度，去除可能的杂质如蛋白质、多糖等。

3. 核酸浓度和片段大小测定：这两项指标直接影响到测序效率和结果的准确性。

4. 均一性检查：确保所有样本的核酸质量和浓度在可接受的范围内。

5. 质控图的生成：通过实时监控测序过程中的质量参数，及时发现和纠正问题。

该标准对于规范我国高通量测序实验操作，提升科学研究和临床应用的标准化水平具有重要意义。

GBT 40664-2021 用于高通量测序的核酸类样本质量控制通用要求.pdf部分内容预览：

国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会

GB/T 406642021

DBJ50-314-2019 玻化微珠无机保温板建筑保温系统应用技术标准范围 规范性引用文件 术语和定义 质量控制要求 4.1 通用要求 4.2 基因组DNA核酸类样本质量要求 4.3总RNA核酸类样本质量要求 质量检测方法 5.1 主要设备和仪器 5.2 核酸类样本质量检测方法 附录A（资料性）核酸类样本完整性检测示例图

GB/T 406642021

本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国生物样本标准化技术委员会（SAC/TC559)提出并归口。 本文件起草单位：深圳华大生命科学研究院、中国计量科学研究院、深圳华大智造科技股份有限公 同、青岛华大基因研究院、深圳华大基因股份有限公司、上海生物芯片有限公司、广州中医药大学第二附 禹医院（广东省中医院）、湖北国际旅行卫生保健中心（武汶海关口岸门诊部） 本文件主要起草人：祝珍珍、王晶、苏小珊、耿春雨、李倩一、陈芳、刘心、谢泽宇、陈利、牛春艳、黄翔， 张小燕、许靖曼、陈曲波、龚睿、王鹏、周艳、孙静、曾璇

本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任， 本文件由全国生物样本标准化技术委员会（SAC/TC559)提出并归口。 本文件起草单位：深圳华大生命科学研究院、中国计量科学研究院、深圳华大智造科技股份有限公 司、青岛华大基因研究院、深圳华大基因股份有限公司、上海生物芯片有限公司、广州中医药大学第二附 属医院（广东省中医院）、湖北国际旅行卫生保健中心（武汉海关口岸门诊部）。 本文件主要起草人：祝珍珍、王晶、苏小珊、耿春雨、李倩一、陈芳、刘心、谢泽宇、陈利、牛春艳、黄翔 张小燕、许靖曼、陈曲波、龚睿、王鹏、周艳、孙静、曾璇

随着高通量测序技术的不断发展和广泛应用，越来越多种类的核酸样本被用于高通量测序，从而在 ONA和RNA的分子水平来揭示不同物种间核酸序列的差异以及特定生物学过程和疾病发生过程中 的分子机理。由于核酸样本的质量会对高通量测序的数据结果产生直接影响，因此制定用于高通量测 序的核酸类样本质量控制的通用要求就显得尤为紧迫和重要，从而保证高通量测序的核酸样本具备达 标的质量，进而得到可靠的测序数据，避免信息错误和信息丢失等情况的出现。 本文件是基于高通量测序技术应用和验证数据而制定，规定了多种高通量测序类型的核酸样本准 人要求，从而提高测序的成功率及准确性，对于规范整个高通量测序市场起到了重要作用

GB/T 406642021

用于高通量测序的核酸类样本

本文件规定了用于高通量测序的基因组DNA以及总RNA核酸类样本的质量控制通用要求，包括 样本检测的术语和定义、质量控制要求、质量检测方法。 本文件适用于从新鲜血液、唾液、动植物组织、细胞培养液以及菌液等样本中提取的真核生物和原 核生物的基因组DNA和总RNA样本

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于 本文件。 GB/T30989 高通量基因测序技术规程 GB/T35537 高通量基因测序结果评价要求 GB/T37864生物样本库质量和能力通用要求

发生物有4种rRNA，它们分子大小分别是5S.5.8S.18S和28S

凝胶电泳gel electrophoresis;GE 一种简便高效的分离和纯化DNA片段的方法。 注：由于DNA分子的双螺旋骨架两侧带有含负电荷的磷酸根残基，因此在电场中向正极移动。在一定的电场强度 下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，常用的分子筛有琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶等。具有不同的 相对分子质量的DNA在分子筛中泳动速度不一样，因而可依据DNA分子的大小来使其分离。在电泳过程中 可以通过将样品和示踪染料或相对分子质量标准参照物一起进行电泳而得到检测。通常包括自配制及商业化 蔬制胶院山

使用微管道（尺寸为数十到数百微米)处理或操纵微小流体（体积为纳升到微升）的系统所 学和技术。

对已知序列的参考品进行测序，经过碱基识别后比对到已知序列上，统计比对正确的碱基数占测月 获得的总碱基数比例。 『来源:GB/T 35537—2017,3.1.4]

用于高通量测序的核酸类样本应根据 中的碱基测序准确率的要求进行质量控制 生物样本及相关数据的使用应遵守区域、国家和国际的伦理规范

4.1.3生物样本的前处理过程、 保存、销毁、运输等操作应符合GB/T37864的要求。 4.1.4样本质量要求应通过完整性和样本浓度确定

4.2基因组DNA核酸类样本质量要求

4.2.1基因组DNA完整性

基因组DNA是组成生物基因组的所有DNA。其完整性应符合凝胶电泳主带单一，在23kb2 清晰条带，且样本无严重降解。如主带不清晰，弥散现象严重则为严重降解。完整性检测图谱见限 中A.1。

4.2.2基因组 DNA样本浓度

单位体积的液体里含核酸的量， 可使用质量浓度（ng/μL）表示。基因组DNA浓度低于0.5ng/μL 时仪器检测精度不够且影响文库构建的成功率，不同文库构建类型和不同高通量测序仪对样本浓度要 求不同样本浓度应大于0.5 ng/uL

4.3总RNA核酸类样本质量要求

4.3.1总RNA完整性

总RNA是从基因组转录出来的所有转录产物。包括信使RNA、核糖体RNA及一些与转录调控、 转录后加工及转录后翻译有关的非编码RNA。可通过总RNA的检测确定RNA的完整性。 RNA样本的完整性宜通过微流控或自动化凝胶电泳分析总RNA的RIN值以及rRNA的28S 8S或23S/16S比值进行判断（其中原核生物应使用23S/16S数值进行判断，真核生物应使用28S/18S 效值进行判断），真核生物又分为人、动物，植物、真菌和昆虫这三类作不同要求。不同物种的总RNA 完整性要求见表1。微流控分析检测图谱见A.2~A.5

表1总RNA样本质量要求

4.3.2总RNA核酸类样本浓度

总RNA样本浓度低于 响RNA文库构建的成功率，不同文 类型和不同高通量测序仪

5.1.1凝胶电泳仪。琼脂糖凝胶电泳相关设备及仪器！ 5.1.2微流控电泳分析仪

5.1.1凝胶电泳仪。琼脂糖凝胶电泳相关设备及仪器

3定量荧光计：可配合荧光染料检测试剂快速完成核酸浓度的读取，最低应能检测0.2ng/μL的 羊本。

5.1.3定量荧光计：可配合荧光染料检测试剂快 该酸浓度的读取，最低应能检测0.2ng/uL的核 酸样本。

5.2核酸类样本质量检测方法

5.2核酸类样本质量检测方法

5.2.1基因组DNA核酸类样本的检测方法

采用凝胶电泳法检测DNA核酸样本的完整性，宜使用1%浓度的琼脂糖凝胶进行电泳，电 V，电泳时间30min；采用荧光染料法进行核酸浓度的检测，按照对应的荧光染料检测试剂流程 作

5.2.2总RNA核酸类样本的检测方法

采用微流控电泳或自动化凝胶电泳分析法检测总RNA核酸样本的完整性，具体操作参考微流控 电泳或自动化凝胶电泳的操作说明；常规样本宜采用荧光染料法进行总RNA浓度的检测，微量样本宜 采用微流控电泳或自动化凝胶电泳分析法检测总RNA的浓度

A.1基因组 DNA样本完整性检测

GB/T 406642021

附录A （资料性） 核酸类样本完整性检测示例图

凝胶电泳检测基因组DNA样本完整性结果见图A.1。泳道2、泳道3的样本降解严重，高通量 字结果碱基测序准确率低于99%

电泳检测基因组DNA样本完整性结果见图A.1。泳道2、泳道3的样本降解严重，高通量测 基测序准确率低干99%

A.2原核总RNA样本完整性检测

图A.1凝胶电泳检测结果

图A.1凝胶电泳检测结果

微流控电泳检测原核总RNA样本完整性结果见图A.2 注：RIN>7.23S/16S>1.图谱基线呈直线

物总RNA样本完整性检

微流控电泳检测植物总RNA样本完整性结果见图A.3， 注：RIN>6.28S/18S1.图谱基线呈直线

图A.2原核样本微流控电泳检测结果

微流控电泳检测植物总RNA样本完整性结果见图A.3， 注：RIN>6.28S/18S1.图谱基线呈直线

GB/T 406642021

JJF (新) 02-2014 低电势开关地方校准规范A.4昆虫总RNA样本完整性检测

微流控电泳检测昆虫总RNA样本完整性结果见图A.4 注：18S主带清晰，图谱基线呈直线

图A.3植物样本微流控电泳检测结果

微流控电泳检测昆虫总RNA样本完整性结果见图A.4 注：18S主带清晰，图谱基线呈直线

A.5动物总RNA样本完整性检测

图A.4昆虫样本微流控电泳检测结果

微流控电泳检测动物总RNA样本完整性结果见图A.5 注：RIN>7.28S/18S>1.图谱基线呈直线

GB/T 406642021

DB34／T 1589-2012 建筑节能门窗应用技术规程图A.5动物样本微流控电泳检测结果