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（报批稿）《饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定 时间分辨荧光免疫层析定量法》.pdf简介：

您好，您提到的《饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定：时间分辨荧光免疫层析定量法》可能是一份科研论文或者技术报告，主要介绍了一种用于检测饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇（Deoxynivalenol,DON）的新型定量分析方法。脱氧雪腐镰刀菌烯醇是一种真菌毒素，常见于谷物和饲料中，对动物健康和食品安全有重大影响。

时间分辨荧光免疫层析定量法（Time-Resolved Fluorescent Immunoassay, TRFIA）是一种基于荧光免疫技术的快速、灵敏的检测方法。它通过结合抗体和抗原的特异性结合，以及时间分辨荧光技术，可以在很短的时间内定量检测出待测物（如脱氧雪腐镰刀菌烯醇）的浓度。这种方法具有操作简便、特异性高、准确性好以及线性范围宽等优点，对于饲料质量控制和食品安全检测具有重要意义。

然而，由于这只是一个简要的介绍，具体的细节可能包括实验设计、原理、步骤、灵敏度和精确度评估、样品处理方法、标准曲线建立等内容。如果您需要更详细的信息，可能需要查阅完整的论文或者咨询相关领域的专家。

（报批稿）《饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定 时间分辨荧光免疫层析定量法》.pdf部分内容预览：

Determinationofdeoxynivalenolinfeeds

目次前 言III1范围2规范性引用文件3术语和定义4原理.5试剂和材料，6仪器和设备7样品制备8样品前处理9标准曲线制定10检测过程11结果计算12方法性能

本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由江苏省家禽科学研究所提出水质监测业务经费定额标准(试行)（水财务[2014]253号 中华人民共和国水利部2014年7月30日）.pdf，由江苏省畜牧业标准化技术委员会归口。 本文件起草单位：江苏省家禽科学研究所、上海雄图生物科技有限公司。 本文件主要起草人：施寿荣、汪劲能、张鹏飞、肖蕴祺、胡艳、邵丹、沈一茹、张珊、王强

本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由江苏省家禽科学研究所提出，由江苏省畜牧业标准化技术委员会归口。 本文件起草单位：江苏省家禽科学研究所、上海雄图生物科技有限公司。 本文件主要起草人：施寿荣、汪劲能、张鹏飞、肖蕴祺、胡艳、邵丹、沈一茹、张珊、王强，

饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的

时间分辨荧光免疫层析定量法

本文件规定了饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇测定的原理、试剂和材料、仪器和设备、样品制备、样 品前处理、标准曲线制定、检测过程、结果计算和方法性能。 本文件适用于饲料原料、浓缩饲料、配合饲料、精料补充料等试样中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适 用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T14699.1饲料采样 GB/T20195动物饲料试样的制备 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 时间分辨荧光微球timeresolvedfluorescentmicrosphere 形状为球形，直径在几纳米至几十微米之间，微球表面或内部负载有荧光物质，在受到一定的能 量激发时能够发出荧光的微粒，比普通荧光半衰期长。微球表面修饰有合适密度的羧基或其它功能基 团，用于与蛋白或抗体的共价偶联；微球所包理的镧系稀土元素经过了整合，无需解离增强步骤。

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适 用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T14699.1饲料采样 GB/T20195动物饲料试样的制备

为球形，直径在几纳米至几十微米之间，微球表面或内部负载有荧光物质，在受到一定的能 能够发出荧光的微粒，比普通荧光半衰期长。微球表面修饰有合适密度的羧基或其它功能基 与蛋白或抗体的共价偶联；微球所包理的镧系稀土元素经过了整合，无需解离增强步骤。

时间分辨荧光免疫层析定量法timeresolvedfluorescence immunochromatography quantitativemethod

试样中脱氧雪腐镰刀菌烯醇与时间分辨荧光微球标记的特异性抗体结合后，抑制了层析过程中标 记抗体与试纸条T线脱氧雪腐镰刀菌烯醇抗原的免疫反应，使T线时间分辨荧光强度降低，质控线Q 线结合的荧光标记物浓度与样品中玉米赤霉烯酮的浓度无关。层析结束后，通过仪器检测计算试纸条 工线和C线的时间分辨荧光强度比值和设定的标准曲线进行准确定量分析

图1脱氧雪腐镰刀菌烯醇时间分辨荧光免疫层析定量试纸条结构示意图

结合垫包被荧光微球标记的脱氧雪腐镰刀菌烯醇抗体，T线包被脱氧雪腐镰刀菌烯醇封闭抗原，C线包被二

本：玉米基质空白样本，呕吐毒素含量<25μ

6.1天平：感量0.01g，最大量程500g。 6.2涡旋振荡器：0r/min～2500r/min。 6.3离心机：转速≥4000r/min。 6.4微量可调移液器：20μL～200μL，0.1mL～1mL。 6.5干式恒温孵育器：37.0℃土2.0℃（不带鼓风）。 6.6时间分辨荧光免疫定量分析仪：激发波长：365nm±5nm、发射波长：615nm±5nm，用于 读取试纸条的荧光信号并自动计算定量的检测结果。

安GB/T14699.1取样，按照GB/T20195制样备用

8.1称取1.0g土0.02g样品于10mL离心管中，用移液器（6.4）加入5mL提取液（5.11），用 涡旋振荡器（6.2）振荡提取5min，用离心机（6.3）4000r/min离心1min，上清备用；如果样品 浓度过高，用提取液（5.11）稀释。 8.2取100μL样品提取液（8.1），加入到600μL稀释液（5.12），混匀后待点样检测。

9.1空白基质溶液制备：取10g阴性样品于100mL离心管中，加入50mL提取液（5.11），用涡旋 振荡器（6.2）振荡提取5min，用离心机（6.3）4000r/min离心1minGBT 50445-2019 村庄整治技术标准.pdf，上清备用。 9.2分别吸取脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准储备液（5.14）0.000mL、0.004mL、0.010mL、0.020mL、 0.060mL、0.120mL、0.200mL、0.300mL、0.400mL于5mL容量瓶中，用空白基质溶液（9.1）定 容，分别相当于0ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、300ng/mL、600ng/mL、1000ng/mL、 1500ng/mL和2000ng/mL浓度标准工作溶液。 9.3取100μL标准工作液（9.2）分别加入600μL稀释液（5.12），混匀后由低浓度到高浓度进 行检测（10）。仪器软件可根据T线信号值与C线信号值的比值（T/C）和标准工作溶液浓度的自然对 数值（Inc）建立标准曲线。 9.4同批次试纸条只需建立一次标准曲线，将建立好的标准曲线与项目信息存储于ID卡中，便于样 品随时随地检测。

.1将干式恒温孵育器（6.5）开机，设置温度37℃，待温度升至37℃后方可使用。 0.2时间分辨荧光免疫定量分析仪（6.6）预热5min后，插入试纸条所对应的ID卡（5.15）

10.3从铝箔袋中取出脱氧雪腐镰刀菌烯醇荧光免疫定量检测试纸条（5.16），水平放置于干式恒温 孵育器（6.5）。 10.4用移液器（6.4）吸取100μL经过前处理的待测样品（8.2）加入试纸条的加样孔中，盖上孵 育器盖开始计时孵育6min。 10.5孵育结束后将试纸条（5.16）插入荧光免疫定量分析仪（6.6）的试纸条插槽中，点击读数

10.3从铝箔袋中取出脱氧雪腐镰刀菌烯醇荧光免疫定量检测试纸条（5.16），水平放置于干式恒温 孵育器（6.5）。 10.4用移液器（6.4）吸取100μL经过前处理的待测样品（8.2）加入试纸条的加样孔中，盖上孵 育器盖开始计时孵育6min。 10.5孵育结束后将试纸条（5.16）插入荧光免疫定量分析仪（6.6）的试纸条插槽中，点击读数

样品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量以质量分数X计，数值以微克每千克（μg/kg）表示。仪器 公式自动计算。

PxVxnx1000 mx1000

式中： P一从标准曲线上查得的待测液中脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量的数值，单位为纳克每毫升（ng/mL）； 一样品待测液体积的数值，单位为毫升（mL）： n一样品稀释倍数； m一样品质量的数值JGJ／T 472-2020标准下载，单位为克（g）。 计算结果保留至小数点后两位。