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GBT 39729-2020 细胞纯度测定通用要求 流式细胞测定法.pdf简介：

"GBT 39729-2020 细胞纯度测定通用要求 - 流式细胞测定法"是中国国家标准（GB/T）中的一项技术规范，它详细规定了使用流式细胞术（Flow Cytometry）进行细胞纯度测定的一般要求和方法。流式细胞术是一种高通量的细胞分析技术，通过让单个细胞通过激光和荧光染料，然后根据其特定的光散射和荧光信号来分析和分类细胞，主要用于细胞表面标志物检测、细胞形态学分析和细胞分类等。

该标准旨在确保细胞纯度测定的准确性和一致性，涵盖了实验设计、样本处理、数据分析、结果解释等各个环节，对于实验室进行细胞生物学研究、细胞制品质量控制、疾病诊断和治疗等领域具有重要的指导意义。它为相关行业提供了一套标准化的操作流程和质量控制标准，以提升细胞纯度测定的科学性和可靠性。

GBT 39729-2020 细胞纯度测定通用要求 流式细胞测定法.pdf部分内容预览：

国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会

GB/T39729—2020目次前言引言1范围2规范性引用文件3术语、定义和缩略语4方法原理5通用要求5.1试剂或材料5.2仪器设备5.3样本制备5.4试验步骤5.5数据分析5.6方法确认5.7报告参考文献

GB/T39729—2020

本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任， 本文件由国家标准物质研究中心提出并归口， 本文件起草单位：中国计量科学研究院。 本文件主要起草人：刘瑛颖、王晶、陈川、傅博强、袁宝珠、牛春艳、隋志伟

街区房屋立面改造工程清单(含图纸)GB/T 397292020

细胞纯度是评价和分析细胞样本特性与细胞产品质量的基本参数，因此医学检验、生物医药研 和质量检验等领域需要广泛开展细胞纯度的测量。流式细胞术可对液体中悬浮单颗粒或细胞进 、多参数分析，是一种常用的细胞纯度测量方法。为了实现不同实验室、平台、操作人员等测量系 之间的数据一致性，需要对通过流式细胞术进行细胞纯度试验的技术环节标准化

GB/T39729—2020

本文件描述了流式细胞仪测定细胞纯度的术语、定义和缩略语、方法原理，以及包括试剂或材料、仪 器设备、样本制备、试验步骤、数据分析、方法确认和报告的通用要求 本文件适用于研究、生产与检验中通过流式细胞仪进行的细胞纯度的测定

文件没有规范性引用文件

下列术语和定义适用于本文件。 3.1.1 目标细胞celloftestingtarget 与检测目标相一致，具有流式细胞仪可检测特征（如大小、数量、特定标志物)的细胞。 3.1.2 细胞纯度cellpurity 目标细胞占样本总细胞数量的百分率。 3.1.3 细胞染色cellstaining 细胞特定成分与荧光染料或标记了荧光染料的特异性抗体结合后进行检测的一种技术 注：特定成分为蛋白质、DNA、RNA等

下列缩略语适用于本文件。 FSC：前向角散射光（ForwardScatter） SSC：侧向角散射光（SideScatter）

使用流式细胞仪，通过总细胞和目标细胞不同的光学（散射光和荧光)特性，对待测样本中的总 目标细胞进行区分和计数。根据总细胞和目标细胞的测量数量，计算得到目标细胞纯度。

GB/T 397292020

5.1.2荧光染料标记的抗体

确保选择的荧光染料标记的抗体对目标细胞具有

鞘液应为无荧光本底的平衡电解质溶液，其洁净度、吸光度、PH值、渗透压应满足流式细胞仪的 要求。

缓冲溶液不应造成待测细胞的破裂、形态 重改变或者聚团，不应对待测细胞的光学特性产生显著 求和方法应根据具体细胞类型确定。

固定剂不应造成待测细胞染色后的光学特性和形

5.1.6荧光补偿样品

荧光补偿样品为单荧光染色细胞或者荧光补偿微球。荧光补偿样品的荧光染料应与待测细胞所 发光染料一致。荧光补偿样品的荧光强度至少要与待测细胞一致，或者超过待测细胞的荧光强度

具有荧光检测通道和散射光检测通道，荧光通道能够检测选择的荧光染料，散射光检测通道包括 FSC和SSC。 流式细胞仪应经过校准，并定期核查准确性和精密度

微量移液器量程为10μL～1000uL。微量移液器应经过检定或校准，并定期核查其移取量的准确 度和精密度。

涡旋振荡器使用的涡旋转速不应大于3000r/min。使用者应监测并记录涡旋振荡器的使用转速、 时长等条件

5.2.4温度控制装置

用于细胞染色的孵育温度控制或试剂、样本的保存，例如冰箱。使用者应监测并记录温度控制装置

的温度准确性和稳定性

GB/T39729—2020

根据原始样本的类型选择合适的待测 本制备方式。待测样本应是单分散细胞悬液，即待测 的细胞以单个细胞存在，没有细胞团或细胞碎片

运送条件不应影响待测细胞的生物特性和检测结

待测样本应具有标签，标签上注明样本类型、样本采集和制备的时间和地

细胞染色前，应根据流式细胞仪的性能参数、待测细胞的黏附、目然沉降等特性来调整样本中的细 抱浓度。 如果细胞浓度过高，可用缓冲溶液对待测样本进行稀释，并记录稀释倍数， 根据荧光染料或特异性的荧光染料标记抗体质量参数确定样本量及染料、抗体浓度、孵育条件。 保证待测样本和荧光染料或特异性的荧光染料标记抗体充分混合，应选择合适的涡旋转速和时长 转速过高或时间过长会造成细胞破损。 待测样本完成细胞染色后，应尽快进行上机检测。如果无法尽快上机检测，应通过固定剂进行固定 并适当条件保存，宜4℃8℃避光保存

应根据流式细胞仪的仪器说明书设置仪器的工作条件，包括环境温度、湿度、电源电压、大气压 境光照等

荧光通道的平均荧光强度、变异系数和荧光分辨率

5.4.3细胞纯度的测量

5.4.3.1设置对照

应设置阴性对照、阳性对照、同型对照、荧光扣除对照，用于识别目标细胞并确认目标细胞的染色方 案是否正确。 使用不含任何荧光染料的待测细胞样本作为阴性对照 使用已经证明可有效地与待测荧光染料结合的细胞样本作为阳性对照， 使用与荧光染料标记的抗体相同种属来源、同种免疫球蛋白的相同亚型的相同剂量抗体染色的细 孢样品作为同型对照。 使用两个和两个以上的荧光染料或荧光染料标记抗体组合标记细胞样本时，在完整的染色基础上

5.4.3.5且标细胞设门

GB/T39729—2020

，通过相应散点图中的荧光强度表达，从阳性对照的荧 中区分出目标细胞的阳性信号并进行设门

DB42∕T 1226-2016 智慧社区 智慧家庭设施设备通用规范5.4.3.6信号采集

应在进样稳定后开始采集信号。 总细胞信号采集数量不应小于10000，目标细胞信号采集数量不应小于1000个。若总细胞信号 采集数量为10000时，不能获取1000个目标细胞采集数量，可加大总细胞信号采集数量。 信号采集时间应保持在合理范围内，过长时间可能导致细胞发生聚集或沉降

按照公式（1)计算目标细胞纯度

式中： P——目标细胞纯度； N.——目标细胞数量，单位为个； N.—总细胞数量,单位为个。

式中： P——目标细胞纯度； N。目标细胞数量，单位为个； N.—总细胞数量JTG C30-2002 公路工程水文勘测设计规范，单位为个。

应对具体测量方法进行方法性能确认 方法性能参数包括准确度、精密度、工作范围（检出限、线性 范围等）、特异性、方法稳健性和组间精密度（如操作者间、仪器间和日间变化）等。 可建立评估方法性能参数的方案和标准，制定并保存相应的文件。

报告提供的信息应至少包括： 使用仪器信息，包括仪器的参数设定； b) 试剂名称、来源、批号； c) 测量结果： d) 数据分析程序； e）意外情况。