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实时FQ—PCR在解脲支原体感染实验室诊断中应用的研究.pdf简介：

"实时荧光定量聚合酶链反应（Real-time Fluorescent Quantitative PCR, FQ-PCR）在解脲支原体（Ureaplasma urealyticum）感染实验室诊断中的应用研究"是一篇可能探讨了使用实时荧光定量PCR技术在检测和诊断解脲支原体感染方面的研究。解脲支原体是一种常见的性传播疾病病原体，对公共卫生构成威胁。实时FQ-PCR以其高敏感性、特异性和快速的特点，被广泛用于这类感染的快速检测。

这篇论文可能会详细描述实时FQ-PCR技术的工作原理，如何通过提取样本中的DNA，设计特定的引物和探针来识别解脲支原体的特定基因片段，然后通过荧光信号的变化来实时监测PCR反应的进行，从而定量检测到目标微生物的数量。论文可能还会讨论该技术在实际实验室中的应用效果，如检测的准确性、精密度、以及在临床样本中的应用案例，以及可能存在的局限性和改进策略。

总的来说，这篇论文对于了解如何通过实时FQ-PCR技术提高解脲支原体感染的诊断效率和准确性具有重要的科学价值。

实时FQ—PCR在解脲支原体感染实验室诊断中应用的研究.pdf部分内容预览：

1.2标本采集、保存和运送

男性：取尿*分泌物或用细小棉拭子伸*尿*约2一4毫米，轻抢拭子取 出分泌物，将分泌物或棉拭子置*无菌玻璃管，再用无菌棉球将试管塞紧 后，密闭送捡。 女性：**用无菌生理棉球洗去宫颈外分泌物，再用无菌棉拭子**宫颈 内，停5秒钟后旋动棉拭子采集宫颈分泌物，将棉拭子置*无菌玻璃管， 用无菌棉球将试管塞紧后，密闭送检。女性尿*分泌物采集标本同男性尿 *分泌物标本。

2目的基因的选择及引物

JC∕T 2437-2018 烟气脱硫石膏化学分析方法4.1Uu定标准品的稀释

将定量Uu阳性模板（1×10°基因拷贝/μL）6,000rpm离心数秒， 加*稀释液90uL，充分混匀后标示为10°基因拷贝/uL。另取4支灭 菌0.5mL离心管，分别加*90μL稀释液，先取10°基因拷贝/μL阳性 模板10uL加*第一支离心管中，第一支管中阳性模板含量为10°基因拷

贝/uL。以此类推，第二只管至第四支离心管其阳性模板含量依次为10*、

4.3.2反应曲线*阳性的判读

首先要判读反应曲线是否具备三区的特点，还可进一步将 Baseline数值改为start：0stop：0，观察该曲线是否还具备三区的特征 若具备三区的特征，则为阳性，否则判为*性。结果如图1 所示。

图1Uu阳性曲线和Uu*性曲线 fig.1 Uu postive curve and Uu negtive curve 1 Negative Curve;2PositiveCurve;3Positive Curve

4.3.3PE5700型PCR扩增仪荧光曲线的含义及标准曲线的调节方法 Rn值：也称标准化的报告值，代表在PCR反应过程中所检测到的荧 光信号水平。Rn值是通过将报告染料的信号除以空白对照的基线平均值 计算得到的。在PCR过程中，Rn值随着靶核酸的扩增而增长；直至反应 达到平台期。 CT值：也称循环值，代表在PCR循环过程中，最先检测到高于基 线水平的荧光信号增长时所对应的循环数。 将参数start和stop的值分别设置为A、B(0

图2Uu标准品的Rn对循环数的动力学曲线 fig.2Rn VS Cycles of Uu Standard Reagent

110°基因拷贝/L 210基因拷贝/μL 310°基因拷贝/L 410°基因拷贝/uL 510°基因拷贝/uL 6 基线

标准品的线性方程如下：

之前进行选择。对于我们的试剂一般选在2～8之间。具体步骤如下： 将基线调节参数先设置为00。观察各原始曲线，选择较为平坦的 部分制定A、B值。重新输*参数A、B，分析。 阀值线的选择 阀值线与荧光曲线的交点即为CT值。只有在设置阈值线后，才能利 用标准品的CT值得出标准曲线。阅值线的选择应尽量保证其与所有阳性 标本的对数增长期前段有一交点，而使所有的*性曲线都在阀值线下。在 某些*性曲线有非特异性波动而与阀值线有相交时，应通过单个分析，判 别其*阳性。在某些弱阳性曲线有荧光信号极度下降时，其与阀值线不能 相交，此时也应单独分析，判别*阳性，

DB34／T 1279-2014标准下载5.1液体培养操作程序

5.2Uu培养法结果判读

>104，桔黄色为*性。Mh的半定量结果判读同Uu。

16例临床标本培养后49例呈阳性结果，见表2。

NB／T 42024-2013标准下载表2116例标本Uu培养结果 2The results of Uu in 116 specimens by cu

图4支原体包囊 fig.4 Cystof Mycopiasm