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SL 355-2006 水质 粪大肠菌群的测定--多管发酵法.pdf简介：

SL 355-2006是中国标准的一项规定，全称为《生活饮用水卫生标准——水质 粪大肠菌群的测定 多管发酵法》。该标准主要针对生活饮用水的卫生质量控制，其中粪大肠菌群的测定方法是多管发酵法。

多管发酵法是一种常用的检测环境或食品中大肠菌群（包括大肠埃希氏菌、产气肠杆菌等）的方法。其基本原理是：采集样品后，经过稀释、接种到特定的培养基中，如多管发酵培养基，然后在适宜的温度和时间条件下进行培养。大肠菌群在这些培养基上能够生长形成菌落。通过计数菌落数量，可以推算出样品中粪大肠菌群的含量，以此评估水源的卫生状况。

该方法操作相对简单，但需要专业的实验设备和一定的操作技能，且受环境因素影响较大，需要在严格的控制条件下进行。SL 355-2006标准提供了详细的实验步骤、检测要求和结果评价，以确保检测结果的准确性和可靠性。

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中华人民共和国水利都 发布

前言 范围 方法原理 试验条件与环境 仪器设备 培养基 革兰氏染色试剂 试验步骤 结果计算 注意事项

L13J3-3 加气混凝土砌块墙SL,3552006

本标准是根据中华人民共和国水利部技术标准编制工作计划安排进行制定的。 本标准的体例格式遵循GB/T1.1一2000《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》 的规定。 本标准的主要内容包括：范围、方法原理、试验条件与环境、仪器设备、培养基、革兰氏染色试 剂、试验步骤、结果计算及注意事项。 本标准批准部门：中华人民共和国水利部。 本标准由水利部水文局提出并归口。 本标准主持机构：水利部水文局。 本标准解释单位：水利部水文局。 本标准主编单位：北京市水文总站。 本标准出版、发行单位：中国水利水电出版社。 本标准主要起草人：秦斌、王建厅、高俊杰、冯伶亲、武佃卫。 本标准审查会议技术负责人：齐文启。 本标准体例格式审查人：曹阻

SL 3552006

粪大肠菌群的测定一多管发

本标准规定了水中粪天肠菌群的多管发酵测定方法 本标准适用于地表水、地下水、生活饮用水等，特别是浑浊度高的水中粪大肠菌群的测

用提高培养温度的方法将自然环境中的大肠菌群与类便中的大肠菌群区分开。在44.5 长的大肠菌群，称为粪大肠菌群

试验环境应符合《实验室生物安全通用要求》（GB19489一2004）要求，试验过程要 件下进行。

4.2高压蒸汽灭菌器 4.3 干热灭菌箱 4.4 恒温培养箱（37℃±1℃） 4.5 恒温培养箱（44.5℃±0.2℃） 4.6 玻璃器血（需置于干热灭菌箱中，160℃灭菌2h） 包括：试管、平血（9cm）、锥形瓶、刻度吸管、倒管等。 4.7 接种针、载玻片等 4.8 酒精灯 4.9 紫外灭菌灯 4.10pH计

5.1乳糖蛋白陈培养液

蛋白陈：10g 牛肉膏：3g 乳糖：5g 氯化钠：5g 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液：1mL 蒸馏水：1000mL

蛋白：10g 牛肉膏：3g 乳糖：5g 氯化钠：5g 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液：1mL 蒸馏水：1000mL

将蛋白陈、牛肉膏、乳糖及氯化钠置于1000mL蒸馏水中加热溶解，pH值调整为7.2～7.4，再 加入1mL1.6%溴甲酚紫乙醇溶液，充分混匀，分装于装有倒管的试管中，置高压蒸汽灭菌器中， 115℃灭菌20min，储存于冷暗处备用

5.2浓乳糖蛋白陈增养液

按5.1中乳糖蛋白陈培养液组成，蛋百陈、牛肉膏、乳糖、氯化钠的3倍用量配制。 5.3EC培养液

胰蛋白陈：20g 乳糖：5g 3号胆盐或混合胆盐：1.5g 磷酸氢二钾：4g 磷酸二氢钾：1.5g 氯化钠：5g 蒸馏水，1000mL

胰蛋白陈：20g 乳糖：5g 3号胆盐或混合胆盐：1.5g 磷酸氢二钾：4g 磷酸二氢钾：1.5g 氯化钠：5g 蒸馏水：1000mL

中，置高压蒸汽灭菌器，115℃高压灭菌20min，储存于冷暗处备用。

蛋白陈：10g 乳糖：10g 磷酸氢二钾：2g 琼脂：20~30g 蒸馏水：1000mL 2%伊红水溶液：20mL 0.5%美蓝水溶液：13m

5.4.2储备培养基的制备

使之浴解，书 蒸馏水补足至1000mL，pH值调整为7.2～7.4。趁热用脱脂棉或多层纱布过滤，再加入乳糖，混匀 后定量分装于锥形瓶内，置高压蒸汽灭菌器中，115℃灭菌20min，储存于冷暗处备用。

5.4.3平血培养基的配制

将按5.4.2制备的储备培养基加热融化，无菌操作，根据锥形瓶内培养基的容量，用灭菌吸管按 比例分别吸取已灭菌的2%伊红水溶液和0.5%美蓝水溶液，加人已融化的储备培养基内，并充分混 匀（防止产生气泡），待其冷却至44.5℃后立即将此种培养基适量倾入于已灭菌的空平皿内，待其冷 却凝固后，倒置于冰箱内备用，

结晶紫溶液：结晶紫乙醇饱和溶液（取结晶紫约4～8g，溶于95%乙醇100mL中）20mL， 俊铵溶液80mL，将两种溶液混合，过滤，

6.2助染剂 碘：1g 碘化钾：2g 蒸馏水：300mL 将碘与碘化钾先行混合，加人少许蒸馏水，充分振摇，待完全溶解后再加人其余的蒸馏水，当溶 液由棕黄色变为淡黄色时即应弃取，

7.1水样的采集和保存

7.1水样的采集和保布

采样瓶使用500mL已灭菌的磨口玻璃塞广口瓶，采集水样时，应避免瓶盖及瓶子颈部受杂菌 污染。 灭菌后的采样瓶2周内未使用、需重新灭菌

采集好的水样需放置约4℃冷藏设备内保存运输。一般要求在采集4h内测定。 水样接种量

接种水样总量300mL：在2个装有已灭菌50mL浓乳糖蛋白陈培养液的大试管或锥形瓶中（内有 ，以无菌操作各加入水样100mL；在10支装有已灭菌5mL浓乳糖蛋白陈培养液的试管中（内 ），以无菌操作各加入水样10mL

7.2.2受到不同程度污染的水

将水样充分混匀后，根据水样污染程度确定水样接种量。每个水样至少用3个不同的水样量接 种。同一接种量要有5管。 未受污染的水样接种量为10mL、1mL、0.1mL。受污染水样接种量应根据污染程度加大稀释 度，可接种1mL、0.1mL、0.01mL或接种0.1mL、0.01mL、0.001mL等。 如果体积为10mL【江苏省】城市规划管理技术规定——苏州市实施细则之二“日照影响分析规则”（2015版），则试管内应装有浓乳糖蛋白陈培养液5mL；如接种量不多于1mL，则可接种 于乳糖蛋白陈培养液10mL中。使用的水样量可参考表1

表1接种用水量参考表

以接种水样量10mL、1mL、0.1mL为例： 于各装有5mL浓乳糖蛋白陈培养液的5个试管中（内有倒管），以无菌操作各加人10mL水样； 于各装有10mL乳糖蛋白陈培养液的5个试管中（内有倒管），以无菌操作各加人1mL水样；于各装 有10mL乳糖蛋白陈培养液的5个试管中（内有倒管），以无菌操作各加人1mL1：10稀释水样。共 计15管，3个稀释度。

将已接种的水样混勾后置于37℃恒温内培养24h士2h。产气和产酸的发酵管表明试验阳性。如果

表3燕大肠菌群最可能数（MPN）检数表

水样总量55.5mL，其中5份10mL、5份1mL、5份0.1mL

9.2试验过程中所用玻璃器皿均应要求无菌。 9.3带菌培养基应灭菌后再弃去，其他遵守实验室安全制度。 9.4检验开始前应充分振摇混合水样，以保证粪大肠菌群数量的准确性。 9.5对于污染严重的水样，为了保证在接种后得到一个合适范围的阳性结果，应设置不少于4个的 连续稀释度；当4个连续稀释度的最低管或全部呈现阳性，应加大稀释度。 9.6若复发酵试验阳性结果明显，平板分离试验可以省略

9.2试验过程中所用玻璃器皿均应要求无菌。 9.3带菌培养基应灭菌后再弃去，其他遵守实验室安全制度。 9.4检验开始前应充分振摇混合水样，以保证粪大肠菌群数量的准确性。 9.5对于污染严重的水样，为了保证在接种后得到一个合适范围的阳性结果，应设置不少于4个的 连续稀释度；当4个连续稀释度的最低管或全部呈现阳性，应加大稀释度。 9.6若复发酵试验阳性结果明显TD∕T 1030-2010 开发区土地集约利用评价数据库标准.pdf，平板分离试验可以省略

中华人民共和国水利行业标准 水质粪大肠菌群的测定——多管发酵法 SL 3552006