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GB／T 40392-2021 循环冷却水中军团菌的检测.pdf简介：

GB/T 40392-2021 是中华人民共和国国家标准，标题为《循环冷却水中有害微生物军团菌的检测方法》。该标准主要规定了循环冷却水中军团菌的检测方法和程序，用于评估冷却水系统的卫生状况，防止军团菌的传播，保障公共健康和设施安全。

军团菌是一种能引起肺炎的细菌，特别在冷却水系统中，如冷却塔、空调系统和水处理设备中，由于其适宜的生长环境，可能会导致军团菌病的发生。循环冷却水中的军团菌检测是预防和控制军团菌感染的重要措施。

该标准包括了检测样品的采集、军团菌的分离培养、鉴定和计数等步骤，以及对检测结果的解释和报告要求。检测方法可能包括显微镜直接镜检、PCR（聚合酶链反应）等现代技术，以提高检测的准确性和效率。

遵循此标准，可以确保冷却水系统的卫生管理得到科学和规范的实施，有效防止军团菌引发的公共卫生问题。

GB／T 40392-2021 循环冷却水中军团菌的检测.pdf部分内容预览：

7.1离心机：转速为0r/min～8000r/min。配有300mL～500mL具螺旋盖的离心瓶。 7.2真空泵。 7.3 超声波振荡器或涡旋混合器。 7.4 无菌涂布器。 7.5CO2培养箱：36℃±1℃。 7.6 普通光学显微镜或荧光显微镜。 7.7 紫外线灯：波长为360nm±20nm。 7.8 无菌接种环：直径为3mm。 7.9 无菌平Ⅲ：直径为90mm。 7.10 无菌镊子。 7.11 微量移液器：100μL、200μL。 7.12 无菌微孔滤膜：直径为47mm~50mm，孔径为0.22um或0.45um

7.1离心机：转速为0r/min～8000r/min。配有300mL～500mL具螺旋盖的离心瓶。 7.2真空泵。 超声波振荡器或涡旋混合器。 7.4 无菌涂布器。 7.5 CO 培养箱:36 ℃±1 ℃。 7.6 普通光学显微镜或荧光显微镜。 7.7 紫外线灯：波长为360nm±20nm。 7.8 无菌接种环：直径为3mm。 7.9 无菌平皿：直径为90mm。 7.10 无菌镊子。 7.11 微量移液器：100μL、200μL。 7.12 无菌微孔滤膜：直径为47mm~50mm，孔径为0.22um或0.45um

水样中含有杂质时可静置沉淀或1000r/min离心1min，取上清液备用。

GB/T403922021

在真空过滤系统上安装微孔滤膜，取水样上清液200mL～1000mL过滤，记录过滤水样的体积 Vto。过滤后取下滤膜，置于带盖的无菌容器中，用无菌剪刀剪碎，加15.0mL无菌水，放入涡旋混合器 振荡至少2min（也可将容器放人超声波振荡器中振荡2min～10min，稀释液液面应低于超声波振荡 器水面）充分洗脱，作为浓缩液备用，记录体积V。。 当样品中军团菌的菌落数量超过105CFU/L时，可不进行样品浓缩处理安建质[2020]16号关于推荐混凝土浇筑工艺流程指导意见的通知.pdf，计数时按直接涂布法 计数。

9.2.1将9.1.2的浓缩液（无需浓缩时取原液）分成三份。其中一份不做处理，另两份分别采用热处理 和酸处理方式处理。 9.2.2热处理：移取1.0mL浓缩液（或原液）于一无菌容器中，置于50℃士1℃的水浴中加热30min 9.2.3酸处理：移取3.0mL浓缩液（或原液）于一无菌容器中，加入3.0mL酸缓冲液摇匀，其pH值约 为2.2.放置5min

经处理、热处理、酸处理样品各0.1mL，用无菌涂布器 种液均匀涂布于相对应的GVPC培养基平皿的整个表面

将已接种的平板倒置放人CO2培养箱中，调节CO2浓度为2.5%，温度为36℃土1℃，相对湿度 于95%,培养10 d。

培养期间，在第三天开始检查培养皿，并在培养期结束时进行最终检查，记录可疑军团菌菌落的数 量。在平板上生长小于300个菌落为宜，如有天量军团菌生长，则应减少过滤样品的体积或稀释浓缩 液。军团菌的生长可能被其他菌掩盖或抑制，如果怀疑军团菌被抑制应重新处理水样进行培养。 典型的军团菌菌落通常呈白色、灰色、蓝色或紫色，也可能出现棕色、灰绿色、深红色。菌落表面光 滑，边缘整齐，呈典型毛玻璃状。在紫外光下有荧光，荧光的颜色有助于区分样品中军团菌的不同种类。 为了避免军团菌的死亡，不能将平板长时间暴露在紫外灯下，宜在数秒内完成，

GB/T 403922021

9.7嗜肺军团菌的鉴定

水样中军团菌的计数以每升样品中的菌落数X计，单位为菌落形成单位每升（CFU/L），按公 式（1）计算：

/V 1 N X1000

GVPC培养基上疑似军团菌的菌落数，单位为菌落形成单位（CFU)； 确认的军团菌菌落数，单位为菌落形成单位（CFU)； N 培养基上挑取的疑似军团菌菌落数，单位为菌落形成单位（CFU）； V 一接种的原液的体积的数值，单位为毫升（mL）（原液、热处理样品：V=0.1；酸处理样品： V=0.05)

水样中军团菌的计数以每升样品中的菌落数X计，单位为菌落形成单位每升（CFU/L)，按公 式（2）计算：

.V. N VV. X1000 ( 2

GVPC培养基上疑似军团菌的菌落数，单位为菌落形成单位（CFU)； N 确认的军团菌菌落数，单位为菌落形成单位（CFU）； N 培养基上挑取的疑似军团菌菌落数，单位为菌落形成单位（CFU)； V。 量取的无菌水的体积的数值，单位为毫升（mL）（V。=15.0）； V 接种的浓缩液的体积的数值，单位为毫升（mL）（未经处理的浓缩液样品、热处理样品 V=0.1；酸处理样品V=0.05)； Vot 过滤水样的体积的数值，单位为毫升（mL）。

分别对未经处理、热处理和酸处理样品接种后培养出的军团菌的数量按照公式（1)或公式（2)进 算，取结果的最大值作为该水样中军团菌的数量X，此数值为此份样品中军团菌的最大可能数，

GB/T403922021

1经检测水样中未见军团菌可疑菌落生长时，在检测报告中注明“未检出军团菌”，并注明检测水 积。 2经检测并确认存在军团菌时，在检测报告中注明“检出军团菌”。如需标注军团菌数量时，给出 菌的数量X（CFU/L）。 3经鉴定为嗜肺军团菌时，在检测报告中注明“检出嗜肺军团菌”并给出其血清分型。如需标注 军团菌数量时，给出嗜肺军团菌数量X（CFU/L）

11.1经检测水样中未见军团菌可疑菌落生长时，在检测报告中注明“未检出军团菌”，并注明检测水样 体积。 11.2经检测并确认存在军团菌时，在检测报告中注明“检出军团菌”。如需标注军团菌数量时，给出军 团菌的数量X（CFU/L）。 11.3经鉴定为嗜肺军团菌时，在检测报告中注明“检出嗜肺军团菌”并给出其血清分型。如需标注嗜 肺军团菌数量时.给出嗜肺军团菌数量X（CFU/L）

A.1.2.1半胱氨酸和焦磷酸铁的溶解

A.1.2.2ACES缓冲液

将ACES颗粒加入到500mL水中，于45℃～50℃水浴溶解。另取480mL水溶解氢氧化钾，轻 遥溶解，将两种溶液混匀

A.3选择性培养基（GVPC培养基）

注：此培养基是在BCYE的基础上再加人三种抗生素及甘氨酸。

A.3.1选择性添加剂

GB/T403922021

A.3.2抗生素添加剂的制备

A.3.2.1取适量的多粘菌素B(一般为200mg)溶解于100mL水中，使其浓度为145451U/mL。混匀 后进行膜过滤除菌。用无菌管进行分装，每管5.5mL，于一25℃～一15℃保存。使用时，放至室温后 再用。 A.3.2.2取20mg万古霉素盐酸盐溶解于20mL水中，混匀后，进行膜过滤除菌。用无菌管进行分装， 每管1mL，于一25℃～一15℃保存。使用时，放至室温后再用。 A.3.2.3取2g放线菌酮溶解于100mL水中，混匀后，进行膜过滤除菌。用无菌管进行分装，每管 4mL，于一25℃～一15℃保存。使用时，放至室温后再用。 A.3.2.4以上抗生素添加剂冷冻保存最长时间为6个月

A.3.3GVPC培养基的制备

A.4.2.1溶液 A:0.2 mol/L 盐酸

在1L水中加人17.4mL浓盐酸.混勾。于121℃±1℃高压蒸汽灭菌15min

GBT 33765-2017 地面光伏系统用直流连接器A.4.2.2溶液B:0.2mol/L氯化钾

将14.9g氯化钾溶解于1L水中，于121℃土1℃高压蒸汽灭菌15min。

A.4.2.3酸缓冲液

取3.9mL溶液A和25mL溶 mol/L氢氧化钾调节pH值到2.2土0.2，置于具 皮璃瓶中，该溶液在室温下避光放置不超过1个月

四甲基对苯二胺盐酸盐

四甲基对苯二胺盐酸盐

【五层】4426平米框架教学楼（开题报告、计算书、建筑、结构图）使用前迅速将上述成分溶于水中。

4.6.3硝酸盐还原试剂